Основы гистологической техники - Коржевский Д.Э. - Практическое руководство

Год выпуска: 2010

Автор: Коржевский Д. Э., Гиляров А.В.

Жанр: Патологическая анатомия

Формат: DjVu

Качество: Отсканированные страницы

Описание: Последние десятилетия XX века и начало текущего столетия отмечены значительным прогрессом в создании новых лабораторных диагностических методик и введением в широкую практику современных методов иммуногистохимического исследования. Разработка новых оптических приборов и повсеместное использование цифровых технологий регистрации и архивирования изображений (в том числе полученных с микроскопических препаратов) создают предпосылки для формирования нового стандарта качества морфологического исследования. Гистологическая диагностика XXI века будет характеризоваться более высокой степенью достоверности результатов, а высококачественные полноцветные цифровые изображения гистологических препаратов должны служить убедительным доказательством правильности сделанных выводов, что согласуется и с требованиями страховой медицины.
Таким образом, высокое качество микроскопических препаратов как ранее, так и сейчас является важнейшим условием постановки правильного гистологического диагноза.
Изготовление хороших микропрепаратов невозможно без профессионального владения приемами гистологической техники и понимания принципов, лежащих в основе того или иного способа окраски. К сожалению, получить необходимую информацию о последних достижениях гистотехнологии специалисту-практику бывает трудно. Необходимые пособия для повышения методического уровня лаборантов-гистологов издаются редко и не всегда соответствуют своему назначению. Другим источником знаний об искусстве изготовления микроскопического препарата являются руководства. Однако руководства по гистологической технике являются библиографической редкостью. Новейшие из них, изданные на русском языке в конце прошлого века (Саркисов Д. С, Перов Ю.Л., 1996; Сапожников А.Г., Доросевич А.Е., 2000), давно исчезли с прилавков книжных магазинов. В последующие годы издавались отдельные методические пособия, посвященные частным вопросам применения современных методов микроскопии и иммуногистохимии, которые ввиду малых тиражей остались неизвестными большинству специалистов.
Иностранные же руководства, регулярно переиздающиеся (каждые 5-8 лет)хотя являются достаточно полными и отражают современный уровень развития (технологии как науки, большинству отечественных гистологов недоступны (эти книги отсутствуют в нашей стране как в свободной продаже, так и в крупнейших библиотеках).
Поэтому цель руководства «Основы гистологической техники» состоит в изложении в краткой и понятной форме наиболее существенного материала, необходимого для освоения лаборантом-гистологом и начинающим исследователем-морфологом практических приемов гистологической техники, общих и специальных методов окраски препаратов, а также современных иммуногистохимических методик. Первые четыре главы посвящены методам обработки биологического материала, начиная с его иссечения и заканчивая получением постоянного препарата. В книге «Основы гистологической техники» содержатся сведения о возможностях и особенностях обработки материала в высокотехнологичных автоматизированных системах ускоренной проводки, заливки и окраски препаратов, представлена информация о технических средствах, используемых при подготовке цифровых изображений микроскопических объектов. В главах 5—9 описаны различные методы окраски, представлены выверенные прописи гистологических красителей и подробные протоколы окраски. Глава 10 посвящена основам иммуногистохимического метода, его применению на практике. В главе 11 приведены краткие сведения о микрофотографии. Список литературы включает основные руководства, монографии и обзоры.
Авторы надеются, что представленные материалы позволят разрешить часть вопросов, возникающих у исследователей и гистологов-практиков при освоении новых гистологических методик, и помогут добиться получения препаратов неизменно высокого качества, отвечающих требованиям, предъявляемым современным уровнем развития медицины.

Содержание книги

«Основы гистологической техники»

Взятие материала, фиксация и декальцинация
Фиксация материала и фиксаторы

1. Формалин
2. Этанол
3. Сложные фиксирующие жидкости
4. Фиксация материала для иммуногистохимического исследования

Декальцинация костной ткани

Обезвоживание объектов и заливка в парафин

Обезвоживание материала

Заливка объектов в парафин

Применение целлоидина при заливке в парафин

Изготовление срезов и их наклейка

Изготовление срезов

Подготовка предметных стекол

1. Очистка и обезжиривание обычных предметных стекол
2. Обработка адгезивными средствами

Подготовка срезов к окрашиванию и последующая обработка

Депарафинирование и регидратация срезов перед окраской

Дегидратация, просветление и заключение срезов после окраски

Красители, используемые в гистологии и цитологии

Гематоксилин

1. Квасцовые гематоксилины
2. Железные гематоксилины
3. Гематоксилин с солями других металлов

Эозин и обзорные методы окраски

1. Обзорная окраска препаратов гематоксилином и эозином
2. Обзорная окраска азурэозином

Специальные методы окраски, используемые для изучения структур клеточного ядра

Реакция Фельгена

Выявление ядрышек в интерфазных клетках при помощи метода Ag-NOR

1. Импрегнационный метод выявления ядрышек в ядрах клеток разных тканей
2. Ag-NOR-метод, рекомендуемый для парафиновых срезов и фиксированного в формалине материала

Выявление структурных изменений ядра, характерных дляапоптоза

Методы окраски соединительной ткани

Окраска препаратов по Ван-Гизону

Окраска соединительной ткани по методу Маллори

Окраска соединительной ткани по Маллори в модификации Слинченко

Выявление эластических волокон

Специальные методы окраски

Выявление фибрина — метод ОКГ по Зербино

Выявление повреждений миокарда по Ли

Окраска хроматофильной субстанции нервных клеток по Нисслю

Методы, применяемые для выявления возбудителей инфекционных болезней

1. Окраска микроорганизмов метиленовым синим Лефлера
2. Окраска карболовым тионином Николя
3. Комбинированный способ окраски срезов метиленовым синим Лефлера и карболовым тионином Николя
4. Окраска по Граму — Вейгерту
5. Окраска карболовым фуксином по Цилю — Нильсену
6. Импрегнация серебром по Левадити
7. Окраска вирусных включений по Павловскому

Гистохимические методы окрашивания гистологических препаратов

Выявление включений амилоида

Выявление металлов

1. Выявление соединений железа (III) по Перлсу
2. Выявление соединений меди по Хоуэлу
3. Выявление соединений свинца

Выявление гемоглобина и гемоглобинурийных пигментов

Выявление нейтральных жиров жирорастворимыми красителями

1. Выявление нейтральных жиров по Чиффеле и Путту
2. Выявление нейтральных жиров по Лилли и Ашберну

Выявление углеводов и мукополисахаридов

1. Выявление гликогена по Мак-Манусу
2. Выявление слизи альциановым синим (по Меркулову Л.А., 1969)

Практическое применение методов иммуногистохими на парафиновых срезах

Подготовка материала

Реагенты, необходимые для постановки иммуногистохимических реакций

Общие сведения о порядке работы с использованием наборов, в которых реализован стрептавидин-биотиновый метод детекции первичных антител

Необходимые типы контроля

1. Положительный контроль антигена
2. Отрицательный контроль антигена
3. Отрицательный контроль антител

Демаскирование антигенов

Примеры протоколов иммуногистохимических реакций, применяемых для выявления отдельных ядерных и цитоплазматических антигенов

1. Иммуногистохимическое выявление астроцитов в сочетании с окраской по Нисслю (Коржевский Д. Э., Отеллин В.А., 2004)
2. Иммуногистохимическое выявление нейронов головного мозга с помощью селективного маркера NeuN (Коржевский Д. Э. [и др.], 2005)
3. Иммуногистохимическое выявление нестина в клетках головного мозга (Коржевский Д. Э., Гиляров А.В., 2006)

Краткие сведения о микрофотографии
Литература

скачать учебник: https://depositfiles.com/files/7ab7hs8j2