Теория и практика иммуноферментного анализа - Егоров А.М. - Учебное пособие

Год выпуска: 2007

Автор: А. М. Егоров, А. П. Осипов, Б. Б. Дзантиев, Е. М. Гаврилова

Жанр: Биология

Формат: DjVu

Качество: Отсканированные страницы

Описание: Иммуноферментный анализ (ИФА) является одним из наиболее активно развивающихся направлений химической энзимологии как в нашей стране, так и за рубежом. Это обусловлено тем, что в ИФА уникальная специфичность иммунохимического анализа сочетается с высокой чувствительностью детекции ферментативной метки. В патентной и научной литературе появляется все больше сведений о рекордных пределах обнаружения веществ данным методом (вплоть до 10-21 молей в образце). Высокие результаты достигаются благодаря использованию неограниченных возможностей ферментов — биокатализаторов, которые позволяют создавать каскадные системы усиления различных химических сигналов.
Высокая стабильность реагентов, простота методов регистрации и многие другие достоинства метода ИФА способствовали его широкому внедрению в различные области медицины, сельское хозяйство, биологическую промышленность, охрану окружающей среды, а также в научные исследования. Применение ИФА в различных областях научн§й и практической деятельности ставит перед исследователем задачу: освоить основные приемы, необходимые для самостоятельной разработки метода и его эффективного использования. Что же необходимо для этого знать? Теоретические основы ИФА опираются на современную иммунохимию и химическую энзимологию, знание физико-химических закономерностей реакции антиген — антитело, а также на основные принципы аналитической химии. Разнообразие объектов исследования от низкомолекулярных соединений до вирусов и бактерий, а также необычайно широкий круг задач, связанных с многообразием условий применения ИФА, обусловливают разработку чрезвычайно большого количества вариантов этого метода, в результате чего становится все труднее и труднее ориентироваться в потоке информации и данном методе.
Другая особенность ИФА, с которой сталкивается начинающий разработчик этого метода, является кажущаяся простота изготовления реагентов и выбора оптимальных условий его проведения. Так как метод высоко чувствителен, а измерения носят количественный характер, то исключительно высокие требования предъявляются к качеству реагентов, которые во многих случаях исследователь готовит самостоятельно. В настоящее время накоплен большой опыт в создании реагентов для ИФА, известны критерии, которым они должны удовлетворять, чтобы достичь необходимой чувствительности, изучены основные закономерности реакции антиген— антитело в растворе и на твердой фазе, что позволяет целенаправленно оптимизировать условия проведения анализа.

Высокая чувствительность ИФА достигается также благодаря использованию различных физических методов регистрации ферментативной активности: фотометрических, флуориметрических, а в последние годы био- и хемилюминесцентных. В ряде случаев, особенно связанных с решением технологических задач, успешно применяются электрохимические и микрокалориметрические датчики. Поэтому необходимо хорошо ориентироваться в тех, возможностях, которые определяются особенностью тех или иных методов регистрации.
Как всякий аналитический метод ИФА имеет свои ограничения, связанные, прежде всего, с «шумом», который становится все более значимым по мере того, как растет чувствительность детектирующих систем. Этот «шум» обусловлен биологической природой молекулы детектора (антитела), усилителя (фермента). Изучение природы этих «шумов» и способов их подавления составляет один-из необходимых этапов разработки высокочувствительных методов ИФА.
В книге «Теория и практика иммуноферментного анализа» рассмотрен широкий круг теоретических и практических вопросов, связанных со свойствами антител и ферментов, способов получения реагентов, оптимизации условий проведения анализа, необходимых как разработчикам методов ИФА, так и тем, кто использует готовые реагенты. Она рассчитана на очень широкий круг исследователей, которые могут избирательно относиться к отбору необходимого для них материала, выполняя роль и учебного и справочного пособия.

скачать учебное пособие: «Теория и практика иммуноферментного анализа»